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“敌鼠”(diphacinone) 是一种常见的抗凝血杀鼠剂,属于茚二酮类杀鼠药,其化学名为2 - (2 ,2 二苯基) 乙酰基- 1 ,3 茚满二酮,常使用其钠盐,称为敌鼠钠盐。“敌鼠”为无嗅黄色针状结晶,其钠盐为黄色粉末。“敌鼠”或其钠盐均为高毒品,对小鼠经口LD50为112~196 mg/ kg ,钠盐LD50为6112~100. 7 mg/ kg ;成人口服0106~0. 25 g 敌鼠钠盐可引起中毒,015~2. 5 g 可致死。
该类药主要的毒理作用是拮抗体内维生素K1 的活性,阻碍凝血酶的合成,损害微血管,降低血液凝固能力,从而造成皮下出血和内脏大量出血而引起死亡。该类药以1/ 万的含量配成毒饵,用于卫生灭鼠工作。此类杀鼠剂的中毒潜伏期较长,发病缓慢,一般口服后3~4 d ,长者19 d ,平均10 d 才出现中毒症状,死亡高峰为4~6 d。因误服、使用不当或有意投毒造成人和牲蓄中毒死亡的事件时有发生 。笔者对血和尿中的敌鼠钠盐采用不同的提取净化方法,然后用化学分析法和薄层色谱法进行分析,结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂硅胶GF254薄层板(10 cm ×5 cm) ,青岛海洋化工厂生产;紫外灯(波长254 nm和366 nm) ;无水乙醇,乙酸乙酯,氯仿,甲醇,丙酮,四氯化碳,石油醚,苯,无水硫酸钠,中性氧化铝,均为分析纯。10 %盐酸,0101 mol/ L NaOH ,1 %三氯化铁乙醇溶液;敌鼠钠盐(含敌鼠钠80 %) 由中心消毒科提供,配成2 mg/ ml的丙酮溶液。
1.2 样品的处理
1.2.1 血样的处理取510 ml 血,加10 %盐酸数滴调pH 值为3 ,用乙酸乙酯提取3 ×20 ml 次,合并提取液过自制的10 ml 正己烷淋洗过的净化小柱(三极中性三氧化铝: 无水硫酸钠=0. 2∶015) ,收集滤液于60 ℃水浴挥干,得检样(血) 。
1.2.2 尿样的处理取15 ml 尿,加10 %盐酸数滴调pH 值为3 ,用乙酸乙酯提取3 ×30 ml 次,合并提取液用0101 mol/ L NaOH调pH至9 ,弃有机相,再用乙酸乙酯提取水相3 ×20 ml ,合并乙酸乙酯提取液过正己烷淋洗过的净化小柱(三极中性三氧化铝∶无水硫酸钠= 0. 2∶0. 5) , 收集滤液于60 ℃水浴挥干, 得检样(尿) 。
1.2.3 对照品的处理各取2 g 敌鼠钠盐,分别按血和尿的处理方法提取净化后,挥干得对照品(1) 和(2) 。并把直接用丙酮溶解的2 mg/ ml 敌鼠钠盐作为对照品(3) 。
1.3 “敌鼠”的检验
1.3.1 化学分析法—三氯化铁显示反应分别取用1 ml丙酮溶解的检样(尿) 、检样(血) 、对照品(1) 和(2) 以及2 mg/ ml 的对
照品(3) 溶液1 滴滴于滤纸上,加1 %的三氯化铁醇溶液1 滴。
1.3.2 薄层分析法把上述检样和对照品分别点样于硅胶GF254薄层板上,在3 组不同的展开剂中展开。经展开凉干后, ①在254nm波长的紫外光照射下观结果;②在366 nm波长的紫外光照射下观察结果;③上述薄层板喷雾1 %三氯化铁乙醇溶液后再观察结果。展开剂: ①三氯甲烷∶乙酸乙酯∶乙酸= 4∶2∶1②四氯化碳∶甲醇= 2∶1③石油醚∶苯= 10∶1
2 结果
三氯化铁显色反应对照品及样品与三氯化铁的反应均呈砖红色。
3 讨论
3.1 提取净化条件的选择
3.1.1 血样的净化由于血样少,检材有限,所以在提取净化过程中中性Al2O3 和无水Na2SO4 的量一定要适度。用量大了,“敌鼠”的提取率低。可能无法检验;用量小了,净化效果不好,最终影响实验结果。实验表明:采用中性Al2O3∶无水Na2SO4 =0. 2∶015 ,正好使510 ml 血样得到很好净化。
3.1.2 尿样的处理尿样成分较复杂,实验比较了直接用自制小柱净化与用反提后再过小柱,发现用10 %盐酸调pH 3 提取后再用的0101 mol/ L NaOH调pH 9 反提,净化效果更好,杂质对检验结果的干扰小。
3.1.3 展开剂的选择通过对3 组不同展开剂的Rf 值及显色结果的比较,发现虽然一些文献常推荐石油醚∶苯(10∶1) 作为敌鼠钠盐薄层色谱检验的展开剂,但对于生物检材,这组展开剂分离效果并不好。在实验用的3 组展开剂中,四氯化碳∶甲醇(2∶1) 的展开效果最好。
3.2 检测方法的比较三氯化铁显色反应和薄层法的检测结果一致。三氯化铁显色反应分析速度快,简便易行,可以作为一种筛选方法使用,要作进一步确认可用薄层法。
3.3 本实验的关键是检材的提取净化如果净化不好,不能得到明显的显色结果。检材通过自制小柱净化后,得到斑点清晰、分离出好的图谱。
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